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실험 목적 -
유산균을 그람염색하여 모습을 관찰한다.
준비물 -
현미경, 슬라이드 글라스, 커버글라스, 루프, 스포이트, 알코올램프(랩버너), 실험용 장갑, 핀셋,
크리스탈 바이올렛 용액, 그람아이오딘용액, 탈색제(아세톤-에탄올), 샤프라닌 용액, 생리식염수, 유산균
실험 과정 -
① 슬라이드 글라스를 알코올 솜으로 깨끗이 닦아 지방을 제거하고, 균이 올라갈 면을 표시한다.
② 슬라이드 글라스 위에 멸균 생리식염수 한 방울 떨어뜨린다.
③ 한천 배지에서 18-24 시간 배양한 균을 루프로 소량 따서 슬라이드 글라스 위의
생리 식염수에 잘 푼다.
④ 알코올램프 위를 3-4 회 통과시키면서 불꽃에서 건조 고정한다.
⑤ 크리스탈 바이올렛 염색액을 한 방울 떨어뜨린 후, 약1분간 반응시킨다.
⑥ 염색액을 씻어내고, 그람아이오딘 용액을 충분히 떨어뜨린 후 약 1분간 반응시킨 후 씻어낸다.
⑦ 탈색제용액을 사용하여 충분히 탈색시킨 다음 흐르는 물로 탈색제를 씻어낸다.
⑧ 대조 염색으로 샤프라닌 O 용액을 충분히 떨어뜨린 후 약 30초간 염색한다.
⑨ 흐르는 물로 염색액을 씻어내고 건조시킨 다음 커버글라스를 덮어, 현미경으로 그람염색성을
관찰한다.
실험 결과 - 세균이 염색된다.
실험 원리 -
？ 세균
- 단세포 원핵생물로, 지구상 거의 모든 곳에서 발견.
- 펩티도글리칸 성분으로 된 세포벽을 가지고, 원형으로 된 1개의 염색체를 가짐.
- 편모로 운동하기도 하고, 선모가 발달하여 다른 세포에 부착하거나 유전자를 교환할 수 있음.
- 분열법으로 번식하며, 내생 포자를 만들어 휴면상태가 되었다가 다시 증식.
- 영양 방식에 따라 종속 영양 세균과 독립 영양 세균으로 나누고,
모양에 따라 구균(원), 간균(막대), 나선균(꼬인모양)으로 구분.
？ 그람염색
- 세균의 세포벽의 구조 차이를 이용하여 분류하는 기초적 세균염색법의 일종.
- 그람염색성에 따라 균의 증식에 필요한 영양소의 종류와 생산하는 독소,
항생제에 대한 내성이 다름.
- 그람양성세균은 세포벽이 크리스탈 바이올렛을 흡수·보유하여 탈색 후에도 보라색이 나타남.
- 그람음성세균은 단백질로 된 외피에 싸여 있어서 크리스탈 바이올렛을 함유하는 능력이 약해
알코올에 의해 보라색은 탈색되고 나중에 사용되는 사프라닌에 의해 붉은색이 나타남.
1) 그람양성균
- 그람염색결과, 보라색으로 염색되는 세균으로 세포벽이 두꺼운 펩티도글리칸 층으로 구성.
- 위액이나 소화효소에 잘 견디며, 페니실린에 민감하게 반응.
Ex)유산균, 폐렴균, 파상풍균, 포도상구균(식중독)등
2)그람음성균
- 그람염색결과, 붉은색으로 염색되는 세균으로 세포벽이 얇은 펩티도글리칸 층과
지질단백질및 지질당으로 구성된 외부막이 존재.
- 색소 저항력이 강하고, 계면활성제 내성이 강함.
- 단순한 구성의 배양액에서도 잘 자라고, 독소가 가열에 의해서도 잘 파괴되지 않음.
Ex)대장균, 콜레라균, 페스트균, 이질균, 등
③ 유산균(젖산균)
- 당류를 발효하여 에너지를 획득하고 다량의 락트산을 생성하는 세균.
- 구균의 형태를 가지거나 간균의 형태를 가지며, 그람양성균.
- 산소가 적은 환경에서 잘 발육하고, 포유류의 장내에 서식하며 장의 기능을 도움
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